Окрашивание airtouch – что это? Аэртач на темные, светлые волосы – техника окрашивания

Мелирование, колорирование и четкие цветовые границы на волосах уже не в моде. Современные тренды диктуют естественность, поэтому техника airtouch (эйртач, аэртач) быстро приобрела популярность. После первого же мастер-класса Владимира Сарбашева (колорист, изобретатель) методику начали практиковать даже голливудские стилисты.

Окрашивание airtouch – что это?

Дословный перевод названия рассматриваемой технологии – «воздушное прикосновение». Окрашивание волос эйртач получило такое имя отчасти из-за способа набора прядей для осветления. Локон предварительно продувается потоком прохладного воздуха. Сам изобретатель акцентирует внимание на другой особенности, послужившей выбору названия airtouch, что это очень щадящий метод окрашивания. Он практически не повреждает структуру волос, мягкий, как прикосновение легкого ветерка.

Главным нюансом аэртач является не способ набора прядей и деление локонов на несколько слоев, а возможность максимально щадящей последующей коррекции. Новая техника окрашивания волос airtouch позволяет избежать обработки уже осветленных участков. После коррекции стыки прикорневой зоны и основной массы прядей абсолютно не видны, а локоны остаются живыми и здоровыми.

Airtouch – техника окрашивания

Упрощенно описываемая методика представляет собой осветление очень тонких полос с растяжкой от корней к кончикам. После обесцвечивания волосы тонируются специальной эмульсией. Окрашивание аэртач осуществляется с помощью фена Оттягивается тонкий локон, на него подается струя холодного воздуха. Она выдувает слои коротких и пушковых волос, а оставшиеся подвергаются обесцвечиванию и тонированию.

Профессиональное окрашивание airtouch имеет ряд важных особенностей:

1. Схема разделения прядей и вид проборов подбираются индивидуально.
2. Аналогично рассчитывается процентное соотношение обесцвеченных волос к натуральным локонам.
3. Для каждого типа и оттенка прядей вычисляется оптимальная концентрация осветлителя. Она меняется в зависимости от участка окрашивания – снизу минимальная, увеличивается по направлению к корням.
4. Тонирующий состав тоже подбирается индивидуально. Мастер должен смешать несколько красок и нанести уникальный рисунок, добиваясь максимальной естественности.

Airtouch-окрашивание на темные волосы

«Прикосновение воздуха» для брюнеток считается самым сложным вариантом. Пряди нужно осветлить и затонировать так, чтобы сохранить естественный оттенок, придав ему сияние, блики и разноцветные переливы. Для любой гаммы локонов идентично выполняется аэртач-окрашивание волос, техника одна, но тонкости в конкретном случае индивидуальны. Мастер должен учитывать следующие особенности прядей:

• плотность;
• длина;
• густота;
• структура;
• толщина;
• направление роста;
• натуральный цвет;
• состояние.

Качественно сделанное осветление и тонирование для большинства останутся незаметными, волосы будут выглядеть роскошными и ухоженными, но без явного изменения цвета и четких переходов. Градиент очень мягкий и сложный, будто это натуральный оттенок с рыжими, карамельными, шоколадными, золотистыми нотками. Мастера сравнивают с отпечатками пальцев окрашивание airtouch, фото ниже подтверждают, что у каждой женщины оно смотрится по-разному. Постепенно тонирующий состав смывается, и эффект становится более выраженным.

Airtouch-окрашивание на светлые волосы

Обладательницам славянского вида локонов предлагаемый вариант осветления помогает избавиться от «серости» и невзрачности. Airtouch-окрашивание на русые волосы темных оттенков придает им глубины и насыщенности благодаря обрамлению из каштановых, рыжеватых тонких прядей. Натуральный цвет с серым или пепельным подтоном хорошо сочетается с серебристой палитрой. Рыжеватые русые локоны оттеняются медовыми и карамельными бликами.

Airtouch-техника окрашивания блонд

Белокурым женщинам подойдут все варианты пепельной, серебристой и даже седой гаммы, это самый модный современный тренд. Аналогично длинным и средним прядям, отлично смотрится airtouch-окрашивание на короткие волосы. Девушкам со смелыми стильными стрижками легко поэкспериментировать с тонированием. Ягодные, голубоватые и зеленоватые оттенки может придать локонам техника airtouch, окрашивание волос будет выглядеть сочно и экстравагантно. Когда тонирующий состав будет смываться, переходы будут еще мягче, а пряди приобретут естественность.

Airtouch в домашних условиях

«Воздушное касание» – очень сложная и трудоемкая методика, требующая опыта, парикмахерских навыков и специфических знаний о колористике, слоях волос, темпах и характере их роста. По этой причине мастер-классы Сарбашева очень популярны даже среди именитых стилистов. Правильное окрашивание волос аэртач дома сделать невозможно, особенно без посторонней помощи. Реально выполнить осветление и тонирование, только напоминающее эффект рассматриваемой техники.

Краска для airtouch

Для начала следует приобрести хорошие расходные материалы, от их качества зависит не только конечный результат, но и последующее состояние локонов. Airtouch-окрашивание волос предполагает обильное обесцвечивание, поэтому может нанести вред прядям, «сжечь» их. Желательно приобрести профессиональный порошок-осветлитель с окислителем, например, Blond Me от Schwarzkopf. Окрашивание методом airtouch требует дополнительной пигментации. Для этого нужен тонирующий состав желаемого цвета и окислитель.

Airtouch-схема

Любой обесцвечивающий порошок нельзя держать на волосах дольше 40 минут, а лучше – до получаса. Классическая технология окрашивания airtouch осуществляется с изменением концентрации осветляющего состава по отдельным зонам (концы, центр, у корней). В домашних условиях времени на это не будет, поэтому лучше использовать упрощенную схему обработки.

Метод окрашивания airtouch:

1. Вымыть и высушить волосы.
2. Поделить их на 4 части – затылок, боковые области и передняя прядь.
3. В каждой зоне начинать обесцвечивание с нижних слоев.
4. Захватить прядь толщиной примерно в 1 см. Прочесать ее, продуть потоком холодного воздуха из фена.
5. Оставшиеся в гребне волосы положить на кусочек фольги.
6. Нанести на локоны осветлитель (обильно), «растянуть» его кисточкой к корням.
7. Завернуть прядь в фольгу.
8. Аналогично обработать всю массу волос.
9. Через 30-40 минут с момента обесцвечивания первого локона снять фольгу и вымыть голову.
10. Высушить пряди.
11. На весь объем волос нанести тонирующую краску.
12. Выдержать ее, согласно инструкции.
13. Еще раз вымыть и высушить голову, сделать укладку.

Airtouch – уход за волосами

Даже с учетом щадящего воздействия описываемая техника остается обесцвечиванием, которое портит пряди. Чтобы окрашивание airtouch не спровоцировало сухость локонов, их ломкость и выпадение, сечение кончиков, важно позаботиться о защите. Стилисты дают подробные советы, позволяющие избежать сильного повреждения прядей и нормализации их структуры.

Уход за волосами после airtouch:

1. Мыть голову, начиная с корней, на всю длину распределять только пену.
2. Подобрать мягкий или органический шампунь и питательный бальзам.
3. Регулярно делать увлажняющие маски.
4. Для кончиков применять специальные масла или сыворотки.
5. Избегать агрессивных температурных воздействий и частых горячих укладок.

мелирование + окрашивание, шатуш, балаяж, Airtouch (Lebel/Aveda) – Салон Рейна

Наш салон красоты находится на юго-западе Москвы. У нас работают опытные мастера, профессионалы своего дела, парикмахеры, стилисты и визажисты. Мы предлагаем сложное окрашивание волос по доступной цене в Москве в салоне Рейна – один из самых востребованных видов услуг в индустрии красоты: 

• Мелирование любой сложности;
• Окрашивание волос шатуш, в технике балаяж, айр тач;
• Восстановление образа после неудачных домашних «экспериментов» или исправление вреда, нанесенного плохими специалистами.
• Сложное окрашивание волос блонд, в любые другие цвета по вашему выбору.

Покрасим длинные локоны, делаем сложное окрашивание на средние волосы и каре, короткие стрижки. Сделаем качественное сложное окрашивание на короткие волосы, покрасим длинные локоны клиенток. Все будет произведено с потрясающими результатами. Производим окрашивание волос балаяж блонд, в другие цвета, мелирование Airtouch. Применяем технику шатуш – попробуйте наш эффектный шатуш на каре и другие прически!

В работе мы используем косметические средства наших партнеров – японской компании Lebel и американского производителя Aveda. Это одни из признанных лидеров мирового рынка. Их продукция отличается не только высоким соотношением цена/качество, но и производится только из природных компонентов. Эти краски эффективны, дают яркие оттенки, они безопасны и основаны на большом уважении к природе.

Сложное окрашивание волос – мелирование, шатуш, балаяж, Airtouch

Почему говорят «сложное окрашивание на длинные волосы»? На самом деле длина не принципиальна. Речь идет о том, что применяется несколько оттенков краски, и кстати поэтому процедура занимает довольно много времени. Цель мастера – достигнуть максимально плавных переходов цвета, так, чтобы граница между оттенками сливалась.

Процесс окрашивание волос мелированием в блонд часто подразумевает использование нескольких техник, окрашивание коротких, длинных средних волос при мелировании в блонд даст девушке или женщине следующие преимущества: 

• Натуральные переходы цвета, естественность и гармоничная игра оттенков.
• Огромная вариативность – выбор красок сейчас огромный.
• Такой вариант покраски подходит всем клиентам, подчеркивает преимущества внешности и скрывает недостатки.
• После процеуыры вас ждет простой уход, поскольку цвета не имеют четких границ.

Существует множество иностранных терминов – омбре, шатуш, балаяж, аэртач. По большей части это все варианты техники мелирования. Ниже мы расскажем о самых популярных техниках покраски на сегодняшний день.

Техника окрашивания волос шатуш

При покраске локонов по такой технологии, сама процедура происходит при доступе воздуха, открыто, применяется прием «растягивания цвета». Этот вариант подходит для любой стрижки и возраста. Окрашивание шатуш на средние волосы часто востребовано девушками с темными локонами. Она дает возможность «примерить» на себя «светлый» образ. Разумеется, шатуш идеально подходит светловолосым, а вот с рыжими девушками работы будет побольше, но результат также может впечатлить. Вообще, эта техника требует особенного мастерства колориста. Особенно трудоемким является окрашивание шатуш на короткие волосы.

Преимущества окрашивание волос шатуш в блонд: 

• Это щадящий метод, мелирование и воздействие краски затрагивает только часть локона.
• Не требуется особенно сложного ухода.
• В Москве цена на окрашивание волос шатуш достаточно невысокая.
• Окрашивание волос после шатуш не вызовет больших сложностей, если вы захотите обновить свой образ.

Очень хорошо визуально увеличивается объем прически. Наиболее популярно окрашивание волос шатуш средней длины, сложное окрашивание волос каре.

Окрашивание волос балаяж

Также популярна сложная техника балаяж. Это такая техника, при которой окраска происходит от темного корня к светлым кончикам. Самый светлый цвет на пряди при этом оказывается внизу. Так, например, можно создать эффект «выгоревших прядей». Отличие балаяж от шатуш состоит в том, что первый предполагает нанесение состава на концы, а при втором обычно работают над всей прядью. Часто эта техника используется, чтобы исправить неудачную домашнюю покраску неспециалистом. Эффектно смотрится окрашивание волос балаяж на средние волосы, великолепный эффект при стрижке каре. Работать с длинными прядями по технике балаяж тоже можно, но стоит посоветоваться со стилистом, все зависит от типа, возраста дамы и длины прически.

Преимущества балаяж при средней длине и коротких прическах: 

• Получается объемность, окружающих впечатлят яркость красок и насыщенный цвет.
• Не нужно регулярно подкрашивать, сложности с уходом также не большие.
• Скрывает некоторые недостатки лица.

Балаяж должны проводить только профессиональные колористы, это сложная техника. Кому подойдет балаяж? Балаяж на короткие волосы и прически средней длины рекомендуется, прежде всего, светлым от природы клиенткам. Возраст – молодые и зрелые. Цена окрашивания волос балаяж относится к средней категории.

Аиртач – окрашивание волос по технике Airtouch

Ну и наконец – окрашивание волос аэртач (Airtouch). Это достаточно новый метод, поэтому русскоязычное написание термина не устоялось. На сайтах, посвященных индустрии красоты этот англоязычный термин фиксируются по-русски по-разному. Пишут: «аэртач», «эйр тач», окрашивание волос аир тач. Цена на эту процедуру также достаточно высокая, хотя в Москве стоимость с каждым годом становится все более приемлемой. Поэтому аир тач на средние волосы, аэртач на короткие прически стали частыми запросами в нашем салоне красоты Рейна. И мы можем предложить клиенткам покраску и создание образа на самом высоком уровне! Но сначала разберемся с вопросом.

Что такое сложное окрашивание волос Airtouch? 

Те, кто понимает английский, термин уже перевели, но вряд ли это внесло много ясности. Airtouch – «коснуться воздухом». Но каким воздухом, чего коснуться и как? Все довольно просто. При технике аэртач окрашивание волос на каре, средние и длинные локоны производится с использованием фена. Да, такое возможно – мастер очень аккуратно обдувает прядь феном, приподнимая ее. Способ необычный, но дает очень даже интересный результат.

При этом состав наносится не больше чем на половину общего объема пряди. Специалисты разработали особые схемы, по которым проводится нанесение краски. А заметный и необычный эффект получается из-за того, что фен выдувает более короткие и потому легкие волоски. На первом этапе потребуется высветление прядей, а затем происходит тонирование и колорирование.

Кому подойдет модное аир тач окрашивание волос?

Аир тач окрашивание на короткие волосы, длинные и средние – это работа кропотливая, и результат не даст яркого переливания красок на голове. Методика позволяет женщине выглядеть естественно, натурально. Каждой клиентке нужен особый подход, учитывающий ее особенности. Чаще всего проводится аир тач на средние и длинные прически. Каре и боб – не лучший выбор для Airtouch. В остальном, в хороших руках Airtouch – универсальный метод. Эта техника поможет вам в создании образа бизнес-леди, можно показать себя романтичной натурой, женственной и нежной. Но покрашенные таким образом локоны совместимы и со спортивным стилем, и сочетаются с любым гардеробом.

Преимущества и недостатки эйр тач окрашивания волос

• Получаются красивые переливы, естественный образ.
• Это щадящая техника (воздух из фена, поступает, само собой, холодный).
• После покраски нет необходимости регулярно обновлять цвет, через некоторое время можно вымыть голову красящим шампунем.
• Цвет исходных локонов большого значения не имеет – подойдет и рыжим, и светленьким, и брюнеткам, и шатенкам.
• Техника Airtouch пригодна для коррекции неудачных последствий непрофессиональной домашней покраски.

Рекомендации по уходу стандартные. Не налегать на термическую укладку, на лаки, мыть голову в слегка теплой воде, пользоваться специальными щадящими шампунями, бальзамами, защитными кондиционерами.

Сложное окрашивание волос в Москве в салоне Рейна самыми модными способами

В нашем салоне красоты Рейна всегда открыты двери для вас, наших клиентов. И вы всегда сможете провести любое сложное окрашивание волос, цена услуги доступна всем. Вы высоко оцените проведенную нашими мастерами работу, а также использованные в работе краски Lebel и Aveda.

Никогда еще в Москве сложные техники покраски балаяж, мелирование Airtouch, шатуш и другие сложные варианты не были так близки для вас, доступны, эффектны! Каждая красавица, пришедшая в наш салон, выйдет преображенной, в новом привлекательном образе!

CDC — DPDx — Диагностические процедуры

Модифицированная процедура кислотоустойчивого окрашивания

Этот метод полезен для идентификации ооцист видов кокцидий ( Cryptosporidium , Cystoisospora и Cyclospora ), которые могут быть трудными для идентификации обнаружить с помощью обычных пятен, таких как трихром. В отличие от модифицированного кислотостойкого красителя Циля-Нильсена, этот краситель не требует нагревания реагентов для окрашивания.

Образец:

Можно использовать концентрированный осадок свежего или консервированного формалином стула. Другие типы клинических образцов, такие как дуоденальная жидкость, желчь, легочные образцы (индуцированная мокрота, бронхиальный смыв, биопсия) также могут быть окрашены.

Реагенты:

Эта процедура состоит из четырех этапов, требующих следующих растворов:

1. Абсолютный метанол
2. Кислотный спирт: 10 мл серной кислоты + 90 мл абсолютного этанола. Хранить при комнатной температуре.
3. Kinyoun’s Carbol fuchsin: можно приобрести в коммерческих целях.
4. 3% малахитовый зеленый: растворить 3 г малахитового зеленого в 100 мл дистиллированной воды. Хранить при комнатной температуре.

Процедура:

1. Приготовьте мазок с 1–2 каплями образца на предметном стекле и высушите на предметном стекле при температуре 60°C до полного высыхания. Не делайте мазки слишком толстыми!
2. Фиксация абсолютным метанолом на 30 секунд.
3. Окрашивание карболовым фуксином Киньюна в течение одной минуты. Кратковременно промойте дистиллированной водой и слейте.
4. Обезжирить кислым спиртом в течение 2 минут. Промыть дистиллированной водой и слить.
5. Контрастное окрашивание малахитовым зеленым в течение 2 минут. Кратковременно промойте дистиллированной водой и слейте.
6. Высушите на нагревателе для предметных стекол при 60°C в течение примерно 5 минут. Гора с покровным стеклом с помощью желаемого монтажного носителя.
7. Исследуйте от 200 до 300 полей зрения, используя объективы 40x или выше. Для подтверждения внутренней морфологии используйте иммерсионный объектив с увеличением 100×.

Контроль качества:

Контрольное стекло Cryptosporidium spp. из образца, законсервированного 10% формалином, следует включать в каждый цикл окрашивания. Cryptosporidium spp. окрашивается в розово-красный цвет. Фон должен равномерно окрашиваться в зеленый цвет.

Процедура хромотропного окрашивания

Этот метод окрашивания был разработан в CDC с использованием различных компонентов метода окрашивания трихромом для дифференциации спор микроспоридий от фоновых фекальных элементов.

Образец:

Приготовьте тонкий мазок, используя примерно 10 мкл фиксированной 10% формалиновой взвеси кала (неконцентрированной) на предметном стекле. Можно также использовать концентраты формалина, но количество микроорганизмов будет практически таким же, как и до концентрирования. Зафиксировать на предметном стекле при температуре 60°C до полного высыхания (5-10 минут).

Реагенты:

Эта процедура состоит из шести этапов, требующих следующих растворов:

1. Абсолютный метанол
2. Хромотропное пятно:

   Хромотроп 2R	6,00 г
   Светлый зеленый	0,15 г
   Фосфорно-вольфрамовая кислота	0,70 г
   Уксусная кислота ледяная	3,00 мл

   Смешайте ингредиенты и дайте постоять 30 минут. Затем добавить 100 мл дистиллированной воды. Готовьте свежий для использования каждый месяц.

3. Кислый спирт:

   90% этанол	995,5 мл
   Уксусная кислота ледяная	4,5 мл

4. 95% этанол
5. 100% этанол
6. Ксилол или заменитель ксилола

Процедура:

1. Фиксация мазка абсолютным метанолом на 5 минут.
2. Поместить в хромотропную краску на 90 минут.
3. Обезжирить в кислом спирте всего от 1 до 3 секунд.
4. Промыть 95% этанолом путем погружения.
5. Поместить в две смены 100% этанола на 3 минуты каждую.
6. Поместите две смены ксилола или заменителя ксилола на 10 минут каждую.
7. Слейте предметное стекло и поместите его вместе с покровным стеклом, используя монтажную среду (например, пермаунт). Исследуйте мазок после высыхания, используя не менее 100-кратного погружения объектива в масло или выше. Обследовать не менее 200–300 нефтеиммерсионных полей.

Контроль качества:

Контрольное стекло микроспоридий из образца, консервированного 10% формалином, должно быть включено в каждый цикл окрашивания. Споровые стенки микроспоридий окрашиваются в розовато-красный цвет и имеют размер около 1 мкм. Меняйте все растворы после окрашивания хромотропом через каждые 10 предметных стекол, чтобы добиться надлежащего ополаскивания и обезвоживания. Для точности рекомендуется микроскоп с хорошей оптикой. Используйте по крайней мере 100-кратное увеличение иммерсионного масла для обнаружения организмов; более высокие увеличения лучше. Из-за сложности идентификации этих мелких спор рекомендуется, чтобы второй считыватель подтвердил положительный диагноз.

Процедура окрашивания Quick-Hot по Граму

Это альтернатива хромотропной окраске, которая представляет собой быстрый, надежный и простой метод окрашивания мазков для выявления спор микроспоридий в фекалиях и других клинических образцах.

Образец:

Приготовьте тонкий мазок окрашиваемого материала (например, фекалий, мочи, мокроты, слюны и надосадочной жидкости клеточных культур) и высушите на воздухе.

Фиксированные формалином и залитые в парафин срезы тканей депарафинизируйте, как обычно, гидратируйте в ряде спиртов и поместите предметные стекла в воду перед окрашиванием по Граму.

Реагенты:

1. Набор красителей по Граму
2. Хромотропное пятно:

   Хромотроп 2R	1,0 г
   Светлый зеленый	0,15 г
   Фосфорно-вольфрамовая кислота	0,25 г
   Уксусная кислота ледяная	3,0 мл

   Смешайте сухие ингредиенты, затем добавьте уксусную кислоту. Дайте постоять 30 минут, а затем добавьте 100 мл дистиллированной воды. Готовьте свежий для использования каждый месяц.

3. Кислый спирт:

   90% этанол	995,5 мл
   Уксусная кислота ледяная	4,5 мл

4. 95% этанол
5. 100% этанол

Примечание: В дополнение к перечисленным реагентам требуется метод нагревания реагентов и поддержания определенной температуры. Поскольку нагревать нужно только хромотропную краску, достаточно будет горячей плиты.

Процедура:

1. Мазок для термофиксации (3 раза по 1 секунде каждый раз на медленном огне или 5 минут на подогревателе предметных стекол, установленном на 60°C). Остудить до комнатной температуры.
2. Выполните окрашивание по Граму, минуя стадию сафранина, следующим образом:
   
   1. Поместите предметные стекла в раствор генцианвиолета и оставьте на 30 секунд. Для срезов тканей увеличьте время до 1 минуты.

   №

   2. Аккуратно смойте излишки красителя водой.
   3. Опустите предметные стекла в раствор йода Грама и оставьте на 30 секунд. Для срезов тканей увеличьте время до 1 минуты.
   4. Удалите раствор йода Грама, осторожно промыв его раствором для обесцвечивания. Держите предметное стекло под углом и по каплям добавляйте обесцвечивающий раствор до тех пор, пока он не станет бесцветным. Будьте особенно осторожны на этом этапе, чтобы добиться правильного окрашивания спор.
   5. Аккуратно промойте предметное стекло холодной водой, чтобы удалить излишки раствора обесцвечивателя.
3. Выполните хромотропную окраску следующим образом:
   1. Поместите предметное стекло в подогретый (от 50° до 55°C) хромотропный краситель не менее чем на 1 минуту. Для срезов тканей увеличьте время на 30 секунд.
   2. Промойте в 90% растворе кислоты и спирта в течение 1–3 секунд. Будьте особенно осторожны на этом этапе, чтобы добиться правильного окрашивания спор.
   3. Промыть 95% этанолом в течение 30 секунд.
   4. Промойте дважды, каждый раз по 30 секунд, в 100% этаноле (для этого шага требуются два отдельных контейнера). Дайте высохнуть, затем закрепите Cytoseal60 (Stephens Scientific) или другим подходящим герметиком, следуя инструкциям. Для срезов тканей мы рекомендуем перед установкой предметные стекла кратковременно промыть в растворе 50% этилового спирта/50% ксилола в течение 15 секунд.

Контроль качества:

Контрольное стекло со спорами микроспоридий из образца, законсервированного 10% формалином, должно быть включено в каждый цикл окрашивания.

В образцах фекалий споры микроспоридий должны выглядеть как окрашенные в темный цвет фиолетово-яйцевидные структуры на бледно-зеленом фоне. Дрожжевые клетки, если они присутствуют, должны окрашиваться в темно-фиолетовый или розовато-красный цвет и легко отличимы от спор микроспоридий.

В цитологических препаратах споры микроспоридий должны окрашиваться от темно-фиолетового до розово-фиолетового цвета и могут содержать грамположительные гранулы. Иногда споры демонстрируют заметную полосу в виде экваториального пояса.

Ссылка:

Moura H, Schwartz DA, Bornay-Llinares F, et al. 1997. Новый и усовершенствованный метод «быстро-горячего хромотропа», который дифференцированно окрашивает споры микроспоридий в клинических образцах, включая срезы ткани, залитые парафином. Arch Pathol Lab Med.121:888-893.

Метод модифицированного сафранина (горячий метод) Процедура окрашивания

Для Cyclospora , Cryptosporidia и Cystoisospora видов:

Ооцисты из Cyclospora в клинических образцах обычно обнаруживают с помощью модифицированного кислотостойкого окрашивания (холод). Однако при использовании этого метода ооцисты окрашиваются по-разному: от неокрашенного до полного окрашивания, что может привести к ошибочной идентификации. Метод модифицированного сафранина дает более равномерное окрашивание этих ооцист. Пятно необходимо нагреть до кипения с помощью горячей плиты или микроволновой печи.

Образец:

Можно использовать концентрированный осадок свежего или законсервированного формалином стула. Другие типы клинических образцов, такие как дуоденальная жидкость, также могут быть окрашены.

Реагенты:
Эта процедура состоит из трех этапов, требующих следующих растворов:

1. Кислотный спирт (3% HCl/метанол): медленно добавьте 3 мл соляной кислоты к 97 мл абсолютного метанола. Хранить при комнатной температуре в плотно закрытой таре.
2. Окрашивание сафранином (доступно в наборах для окрашивания по Граму)
3. 3% малахитовый зеленый: растворить 3 г малахитового зеленого в 100 мл дистиллированной воды. Хранить при комнатной температуре.

Процедура:

1. Приготовьте тонкий мазок на предметном стекле и высушите на нагревателе для предметного стекла.
2. Зафиксировать в кислом спирте на 5 минут.
3. Промыть дистиллированной водой.
4. Поместите в кипящий сафранин на 1 минуту.
5. Промыть дистиллированной водой.
6. Докрашивание малахитовым зеленым в течение 1 минуты.
7. Кратковременно промыть дистиллированной водой.
8. Высушите предметное стекло и закрепите покровным стеклом, используя желаемую заливочную среду.

Контроль качества:

Контрольное стекло Cyclospora spp. из образца, законсервированного 10% формалином, следует включать в каждый цикл окрашивания. Cyclospora spp. ооцисты окрашиваются в красновато-оранжевый цвет. Фон должен равномерно окрашиваться в зеленый цвет.

Процедура окрашивания трихромом

Общепризнано, что окрашенные фекальные пленки являются единственным наиболее эффективным средством исследования кала на кишечные простейшие. Постоянно окрашенный мазок облегчает обнаружение и идентификацию цист и трофозоитов и обеспечивает постоянную регистрацию встречающихся простейших. На окрашенном мазке часто видны мелкие простейшие, пропущенные при исследовании влажного препарата (как неконцентрированного, так и концентрированного образца). Техника трихрома Уитли для образцов фекалий является модификацией оригинальной процедуры окрашивания ткани Гомори. Это быстрая и простая процедура, позволяющая получить однородно хорошо окрашенные мазки кишечных простейших, клеток человека, дрожжей и артефактного материала.

Образец:

Образцы обычно состоят из свежего стула или стула, зафиксированного в поливиниловом спирте (ПВС), намазанного на предметные стекла микроскопа и высушенного на воздухе или на подогреве предметного стекла при температуре 60°C. Также можно использовать стул, консервированный в растворе ацетата натрия, уксусной кислоты и формалина (SAF), или некоторые фиксаторы в одном флаконе.

Реагенты:

Эта процедура состоит из семи этапов, требующих следующих растворов:

1. 70% этанол плюс йод: приготовьте исходный раствор, добавляя кристаллы йода к 70% спирту, пока не получите темный раствор. Для использования разбавьте бульон 70% спиртом до получения темно-красновато-коричневого цвета или цвета крепкого чая.
2. 70% этанол (дважды)
3. Трихромный краситель: можно приобрести отдельно
4. 90% кислый этанол
   

   90% этанол	99,5 мл
   Уксусная кислота (ледяная)	0,5 мл

5. 95% этанол
6. 100% этанол (дважды)
7. Ксилол или заменитель ксилола (дважды)

Процедура:

1. Для мазков ПВС поместите предметное стекло в 70% этанол с добавлением йода на 10 минут. Для других фиксаторов следуйте инструкциям производителя. Пропустите этап с йодом для консервантов, не содержащих хлорид ртути.
2. Поместите слайд в 70% этанол на 5 минут.
3. Поместить во второй 70% этанол на 3 минуты
4. Поместите в трихромовый краситель на 10 минут.
5. Обезжирьте 90% раствором этанола с уксусной кислотой в течение 1–3 секунд.
6. Промыть несколько раз в 100% этаноле.
7. Поместить в две смены 100% этанола на 3 минуты каждую.
8. Поместите две смены ксилола или заменителя ксилола на 10 минут.
9. Смонтируйте с покровным стеклом, используя монтажную среду (например, пермаунт).
10. Исследуйте мазок под микроскопом, используя объектив 100×. Обследовать не менее 200–300 нефтеиммерсионных полей.

Контроль качества:

Контрольное стекло известных простейших, таких как Giardia spp. из образца, сохраненного ПВА, следует включать в каждый цикл окрашивания. При тщательной фиксации мазка и правильной окраске цитоплазма простейших трофозоитов будет иметь сине-зеленую окраску, иногда с фиолетовым оттенком. Кисты имеют тенденцию быть немного более фиолетовыми. Ядра и включения (хроматоидные тельца, эритроциты, бактерии) и кристаллы Шарко-Лейдена имеют красную окраску, иногда с фиолетовым оттенком. Гликоген растворяется в растворителях и появляется в организме в виде прозрачной области. Фоновый материал обычно окрашивается в зеленый цвет, обеспечивая приятный цветовой контраст с простейшими.

Процедура окрашивания Calcofluor White

Этот химиофлуоресцентный метод полезен для обнаружения микроспоридий, Acanthamoeba spp., Pneumocystis jiroveci и Dirofilaria spp. Химиофлуоресцентные агенты, такие как Calcofluor, Fungi-Fluor или Uvitex 2B, также известные как оптические отбеливатели, являются быстродействующими и недорогими агентами для скрининга. Эти реагенты чувствительны, но неспецифичны, поскольку многие объекты и организмы, кроме паразитов, могут флуоресцировать. Этот тест следует использовать в качестве инструмента быстрого скрининга, а не для идентификации видов.

Образец:

Приготовьте тонкий мазок, используя примерно 10 мкл свежих или консервированных образцов на предметном стекле. Образцы могут включать стул, мочу, культуру или другие типы образцов. Зафиксировать на предметном стекле при температуре 60°C до полного высыхания (5-10 минут).

Реагенты

Эта процедура состоит из двух этапов, требующих следующих растворов:

1. Абсолютный метанол
2. 0,01 % реагент Calcofluor white: приготовьте 0,01 % раствор в 0,1 М трис-буферном солевом растворе, pH 7,2

Процедура

1. Приготовьте тонкий мазок фекального, культурального или другого образца материала.
2. Зафиксируйте мазок метанолом на 30 секунд.
3. Окрашивание 0,01% реагентом Calcofluor White в течение 1 минуты.
4. Промойте дистиллированной водой и дайте мазку высохнуть.
5. Маунт с покровным стеклом №1 по толщине.
6. Исследование с помощью УФ-флуоресцентного микроскопа, оснащенного сине-фиолетовым фильтром с длиной волны 400 нм или меньше.
7. Для выявления микроспоридий исследуйте мазок с помощью масляного иммерсионного объектива с увеличением 50× или 100×. Споры микроспоридий флуоресцируют ярким сине-белым цветом на черном фоне.

Контроль качества

Контрольное стекло микроспоридий, консервированных в 10% формалине, приготовленное из культуры или образца стула, должно быть включено в каждый цикл окрашивания.

Для получения дополнительной информации об окрашивании образцов стула позвоните в Отдел паразитарных заболеваний по телефону (404) 418-4110.

Методы окрашивания в замороженном отделе: передовая лабораторная практика

Алехандро С. Мендоса, доктор медицинских наук , хирургическая патология/стажер желудочно-кишечного тракта
Джон Бишоп, профессор здравоохранения, заведующий кафедрой клинических наук Департамент патологии и лабораторной медицины, Калифорнийский университет в Дэвисе

ВВЕДЕНИЕ

Окрашивание тканей во время замороженных срезов является одним из наиболее важных шагов в постановке точного патологоанатомического диагноза. Визуализация и различение микроскопических деталей может стать трудным, если окрашивание выполнено неправильно. Здесь мы рассмотрим два распространенных метода окрашивания (H&E, толуидиновый синий), используемых во время замороженных срезов, сравним их преимущества и недостатки, а также изложим лучшие лабораторные методы достижения оптимального результата окрашивания.

H&E

H&E является наиболее часто используемым из всех различных методов окрашивания, доступных для замороженных срезов. H&E прост в использовании, недорог и надежен. Двумя основными компонентами красителей являются гематоксилин и эозин.

Гематоксилин — это натуральный краситель, полученный из кедрового дерева Haematoxylon campechianum, произрастающего в мексиканском штате Кампече. Это основной краситель, который окрашивает кислые компоненты клетки, такие как нуклеиновые кислоты, гликозаминогликаны и кислые гликопротеины, в сине-фиолетовый оттенок. ^1,2,3 Эозин является кислым красителем и служит отличным контрастным красителем для гематоксилина, нацеленного на цитоплазму клеток, особенно митохондрий, секреторных гранул и коллагена. ³ Придает разные оттенки красного и розового цвета цитоплазме разных типов клеток и разных типов соединительных тканей. ⁴

ГЭ можно проводить двумя разными методами: прогрессивным и регрессивным. При прогрессивном методе ткань сначала окрашивают раствором гематоксилина, который содержит избыток солей алюминия или кислоты, повышающей сродство к ядрам. ⁵ Перед нанесением контрастного красителя следует промывание водой. Изменение цвета обусловлено избирательным сродством тканевых компонентов к гематоксилину. При регрессивном методе начальным этапом является окраска среза ткани нейтральным раствором гематоксилина. Затем кислый спирт используется для удаления избытка красителя, а затем щелочной раствор для получения нейтрализованного среза ткани. Интенсивность окрашивания контролируют визуальным осмотром под микроскопом. Прогрессивный метод дает более воспроизводимые результаты, а регрессивный метод предлагает более точную степень дифференциации. ^6,7

Преимущества:

H&E дает превосходную морфологию, обеспечивая отличный контраст между клеточными компонентами. ⁵ H&E обеспечивает лучшую визуализацию некроза отдельных клеток, кератинизации и кератиновых жемчужин, которые являются частыми гистологическими находками при хорошо дифференцированной плоскоклеточной карциноме. H&E обеспечивает стабильность окрашенных тканей в течение многих лет без выцветания. Окрашивание H&E также совместимо в сочетании с различными окислителями, протравами и дифференцирующими агентами. ⁸ H&E надежен и прост в эксплуатации.

Ограничения:

Одним из основных ограничений H&E является продолжительность процедуры окрашивания. Подготовка одного слайда может занять от 3 до 5 минут, в зависимости от протокола практики. Из-за количества используемых красителей выполнение H&E во время замороженного среза иногда может стать сложной задачей, особенно когда одновременно обрабатывается несколько частей или срезов. H&E также плохо окрашивает эластичный материал, ретикулярные волокна, базальные мембраны и липиды. Он дает лишь ограниченное представление о специфической биохимической природе ткани, особенно о кислотных и основных компонентах. ⁹

Толуидиновый синий

Хлорид толония, также известный как толуидиновый синий (ТБ), представляет собой катионный (основной) тиазиновый метахроматический краситель, обладающий высоким сродством к кислым компонентам тканей и окрашивающий нуклеиновую кислоту в синий цвет, а полисахариды — в пурпурный. ¹⁰ Когда он связывается с гликозаминогликанами, он дает красновато-фиолетовое окрашивание, называемое метахромазией. ¹¹ Это свойство особенно полезно при операции Мооса по поводу базальноклеточной карциномы (БКК), поскольку контраст синих агрегатов БКК с красновато-фиолетовой метахромазией гликозаминогликанов в окружающей строме помогает очертить очень маленькие гнезда или несколько скоплений опухолевых клеток из придаточные структуры.

Преимущества:

Окрашивание толуидиновым синим быстрее и проще, чем H&E, и не требует докраски. ¹¹ TB является надежным красителем и требует только одного основного красителя, в отличие от H&E. Минимизация времени окрашивания сокращает время ожидания пациента, облегчает поток пациентов и высвобождает персонал для выполнения других задач. ¹² Метахромазия при базально-клеточном раке и микрокистозной карциноме придатков (MAC) может помочь в обнаружении небольшого количества инфильтрирующих опухолевых клеток, которые в противном случае можно было бы пропустить. ^13,14 Тучные клетки и мукополисахариды в строме, окружающей БКК, могут быть выделены пурпурным оттенком, что побуждает к тщательному поиску остаточной опухоли. Тучные клетки имеют ярко-фиолетовые метахроматические гранулы на ТБ и в изобилии встречаются в строме БКК. Обильные тучные клетки могут свидетельствовать об остаточной опухоли. ⁸

Ограничения:

Ядерная детализация хуже по сравнению с H&E. ¹¹ Многие патологоанатомы/хирурги Мооса не обучены работе с ТБ, поэтому поначалу им может быть трудно использовать ТБ. Им может потребоваться некоторое время, чтобы ознакомиться с характером окрашивания туберкулеза. ⁸ Как и в случае с H&E, сложно идентифицировать эластичный материал, ретикулярные волокна, нервные волокна и жир.

Передовой лабораторный опыт:

Каким бы ни был предпочтительный метод окрашивания замороженных срезов, следующие общие передовые лабораторные методы помогут обеспечить оптимальный результат окрашивания.

• Носите соответствующие средства индивидуальной защиты, чтобы избежать травм и впитывания через кожу.
• Оптимальное окрашивание достигается при толщине срезов 5–6 мкм.
• Не допускайте высыхания замороженных срезов на воздухе во время процедуры окрашивания для лучшего сохранения морфологии ткани.
• Осушайте предметные стекла после каждого шага, чтобы избежать травм и впитывания через кожу.
• Регулярно меняйте растворы для окрашивания в соответствии с принятым лабораторным протоколом. Необходимо учитывать количество окрашенных предметных стекол, а также время их использования.
• Храните химикаты в прохладном, сухом, хорошо проветриваемом помещении, а легковоспламеняющиеся вещества — в специальном шкафу или комнате.
• Обеспечьте достаточную вентиляцию и регулярно проверяйте вытяжные шкафы, которые могут свести к минимуму количество вдыхаемых химических паров.
• Контроль качества следует проводить ежедневно, прежде чем приступить к работе с образцами пациентов.

Общие проблемы с быстрым окрашиванием H&E

1. Слабое окрашивание гематоксилином:
   Из-за автолиза или плохой фиксации, чрезмерной декальцинации, недостаточного времени окрашивания, чрезмерного обесцвечивания, слабого гематоксилина из-за переноса, контаминантов, тонких срезов и недостаточное удаление спирта или недостаточное предварительное ополаскивание водой перед окрашиванием гематоксилином

2. Чрезмерное окрашивание гематоксилином:
   Из-за высыхания ткани, чрезмерного времени окрашивания, слишком слабого или недостаточного времени обесцвечивания, толстого среза.

3. Слабое окрашивание эозином:
   Из-за слишком высокого pH эозина, загрязнения спиртовой промывки, порчи эозина из-за чрезмерного переноса, тонких срезов, недостаточного времени окрашивания, чрезмерной дифференциации последующим 95% спиртом.

4. Чрезмерное окрашивание эозином:
   Из-за более сильного раствора красителя (может быть из-за чрезмерного испарения), использования изопропилового спирта в качестве ополаскивателя, толстых срезов, чрезмерного времени окрашивания

5. Капли воды или белая дымка под покровным стеклом:
   Из-за неполного обезвоживания среза, образованного смесью воды и очищающего вещества.

6. Эозиновое кровотечение из среза ткани:
   Из-за недостаточного выведения спирта, который остается в срезе ткани и вызывает кровотечение.

Метод экспресс-окрашивания H&E:

1. 95% этиловый спирт (10 погружений)
2. Формалин 10%, фосфатно-буферный (10 капель)
3. Дистиллированная вода (10 растворов)
4. Окрашивание гематоксилином, модификация Харриса (30 секунд)
5. Дистиллированная вода (10 растворов)
6. Дистиллированная вода (10 растворов)
7. 95% этиловый спирт (10 растворов)
8. Эозин Y (15 секунд)
9. 95% этиловый спирт (10 растворов)
10. 95% этиловый спирт (10 растворов)
11. 100% этиловый спирт (10 растворов)
12. 100% этиловый спирт (10 растворов)
13. Очиститель (10 капель)
14. Очиститель (10 капель)
15. Покровное стекло с совместимой заливочной средой

Общие проблемы с толуидиновым синим

1. Слабое окрашивание толуидиновым синим:
   Из-за автолиза или плохой фиксации, чрезмерной декальцинации, недостаточного времени окрашивания, чрезмерного обесцвечивания/промывки водой, слабого раствора из-за уноса воды, загрязнений , тонкие срезы

2. Чрезмерное окрашивание толуидиновым синим:
   Из-за высыхания ткани, чрезмерного времени окрашивания, недостаточного обесцвечивания/промывания водой, толстые срезы

3. Капли воды или белая дымка под покровным стеклом:
   Из-за неполного обезвоживания среза, образованного смесью воды и очищающего агента

Образец Метод окрашивания толуидиновым синим:

1. Спиртовой формалин (10 погружений)
2. Водопроводная вода (10 капель)
3. Водопроводная вода (10 капель)
4. 1% Т-синий (40 секунд)
5. Водопроводная вода (10 капель)
6. 70% этанол (10 растворов)
7. 95% этанол (10 растворов)
8. 100% этанол (10 растворов)
9. 100% этанол (10 растворов)
10. Очиститель (10 капель)
11. Очиститель (10 капель)
12. Покровное стекло с совместимой заливочной средой

Заключение:

Предпочтение методу окрашивания в замороженных срезах обычно основывается на индивидуальном обучении или личном опыте. Следует учитывать преимущества и ограничения каждого метода, независимо от того, предпочитаете ли вы H&E или ТБ. Важно понимать, что характеристики окрашивания зависят от техники, марки раствора/красителя и опыта. Четкое понимание принципов методов окрашивания H&E или TB имеет решающее значение для устранения проблем. Окрашивание тканей должно быть воспроизводимым и надежным. Отличная визуализация и различение гистологических деталей срезов тканей имеют решающее значение для быстрой и точной патологической диагностики во время замороженных срезов. Наконец, другие красители, такие как масляный красный O для жира, гематоксилин и периодическая кислота Шиффа (PAS) для выделения гликогена и мукопротеинов, а также некоторые иммуногистохимические красители также доступны во время замороженных срезов, и их следует учитывать, если они доступны.

ССЫЛКИ:

1. Bancroft JD, Gamble M, редакторы. Теория и практика гистологических методов. 6-е изд. Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон; 2008.
2. Бэнкрофт Дж. Д., Стивенс А. Гистопатологические пятна и их диагностическое использование. Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон; 1975.
3. Junqueira LC, Carneiro J. Основная гистология. 11-е изд. Нью-Йорк: McGraw Hill, Inc.; 2005.
4. Росс М.Х., Войцех П. Гистология: текст и атлас. 5-е изд. Балтимор: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2006.
5. Ларсон К., Хо Х.Х., Анумолу П.Л., Чен Т.М. Окрашивание тканей гематоксилином и эозином в микрографической хирургии Мооса: обзор. Дерматол Хирург. 2011 авг; 37 (8): 1089-99. doi: 10.1111/j.1524-4725.2011.02051.x. Epub 2011 2 июня. Обзор. PubMed PMID: 21635628.
6. Прис А. Руководство по гистологическим методам. 3-е изд. Бостон: Литтл, Браун и компания; 1972.
7. Луна Л., редактор. Руководство по методам гистологического окрашивания Института патологии Вооруженных Сил. 3-е изд. Нью-Йорк: McGraw-Hill, Inc.; 1968.
8. Хамфрис Т.Р., Немет А., МакКреви С., Баер С.К., Голдберг Л.Х. Пилотное исследование, сравнивающее окрашивание толуидиновым синим и гематоксилином и эозином базальноклеточной и плоскоклеточной карциномы во время операции Мооса. Дерматол Хирург. 1996 авг; 22 (8): 693-7. PubMed PMID: 8780761.
9. Виттекинд Д. Традиционное окрашивание для рутинной диагностики патологии, включая роль дубильной кислоты. 1. Ценность и ограничения окраски гематоксилин-эозином. Biotech Histochem 2003;78:261-70.
10. Шридхаран, Г.; Шанкар, А.А. (2012). Толуидиновый синий: обзор его химического состава и клинического применения. J Оральный челюстно-лицевой патол. 16: 251–5. дои: 10.4103/0973-029Х.99081.
11. Аслам А., Ааси С.З. Обработка замороженных срезов тканей в хирургии Мооса. Дерматол Хирург. 2019 Декабрь;45 Дополнение 2:S57-S69. doi: 10.1097/DSS.0000000000002260. PubMed PMID: 31764292.
12. Тодд М.М., Ли Дж.В., Маркс В.Дж. Быстрое окрашивание толуидиновым синим для микрографической хирургии Мооса. Дерматол Хирург. 2005 г., 31 февраля (2): 244-5. PubMed PMID: 15762224.
13. Техрани Х., Мэй К., Моррис А., Мотли Р. Улучшает ли двойное использование толуидинового синего и окрашивание гематоксилином и эозином обнаружение базально-клеточной карциномы стажерами хирургии Мооса? Дерматол Хирург.